Окраска по Граму
Это основной способ, использующийся в бактериологии.
Основан на реакции основного парарозанилинового красителя (например, кристаллического фиолетового, метилового фиолетового или их смеси, так называемого генцианвиолета) с йодом.
Продуктом этой реакции является нерастворимое соединение темно-красного цвета в клеточной стенке бактерий. Это вещество удаляется обесцвечивающими растворителями (такими, как ацетон или спирт). Степень обесцвечивания зависит от структуры и толщины клеточной стенки.
Для демонстрации обесцвеченных микроорганизмов используют более светлый докрашивающий краситель.
Грамположительные микроорганизмы устойчивы к обесцвечиванию и остаются темно-пурпурными. Эта устойчивость не постоянна, и при продолжительном обесцвечивании краситель все же смывается.
Грамотрицательные микроорганизмы, как и весь цитологический препарат, окрашиваются в розовый цвет.
В культурах и образцах, содержащих грамположительные микроорганизмы, может содержаться какое-то количество грамотрицательных клеток, особенно если образцы старые.
В литературе описано 4 различных схемы окраски по Граму. Ключевыми моментами являются только порядок добавления реагентов, время обесцвечивания и тщательное удаление всех реагентов.
Существуют готовые наборы для окраски по Граму, к которым должна прилагаться инструкция от производителя.
Методика
 |
1. Зафиксируйте мазок, проведя его несколько раз над пламенем
2. Залейте мазок 0,5% метиловым фиолетовым или 1% кристаллическим фиолетовым и оставьте на 1 минуту
3. Смойте водой
4. Залейте мазок 1% йодным раствором люголя и оставьте на 1 минуту
5. Смойте водой
6. Залейте 95% спиртом и осторожно покачайте, пока краска не перестанет смываться с мазка. Это займет не менее 30 секунд. Если мазок очень толстый, можно добавить свежий спирт для ускорения обесцвечивания.
7. Промойте стекло однократно водой
8. Покрасьте мазок 0,5% основным фуксином в течение 30 секунд, 0,1% нейтральным красным в течение 2 минут, или 0,5% сафранином в течение 10 секунд.
Примечания
- Для обесцвечивания можно использовать ацетон. Он действует быстрее, чем спирт (2 секунд бывает достаточно), но есть опасность слишком сильного обесцвечивания.
- Ацетон более опасен при попадании на кожу или на одежду.
Видео
перейти к списку>>
Статьи по теме:
- Как правильно отправить образцы в диагностическую лабораторию
- Гистопатология, иммуногистохимия и методы in situ
- Бактериологические исследования. Способ отбора материала
- Электронная микроскопия
Другие статьи: