ветеринарная медецина - консультация
крестик
телефон
восклицание
карандаш
форум
Реклама:

 


Биологические свойства культур P.multocida выделенных, при респираторном пастереллезе кроликов 

УДК 619:616.981.45 

Руденко А.А., аспирант Луганский НАУ  

Проведены исследования по изучению биологических свойств P.multocida изолированных от больных хроническими пневмониями кроликов в аматорской кролиководческой ферме. Выделено 16 культур P.multocida при хроническом респираторном синдроме у кроликов, при чем 75 % (11) выделенных культур являлись представителями серовара А. Остальные 4 культуры (25 %) были отнесены к серологическому варианту D.   

Пастереллез является актуальной проблемой для современного кролиководства [6,8,10]. В небольших кролиководческих хозяйствах, где используется замкнутая система воспроизводства животных, распространена хроническая форма болезни, которая характеризуется преимущественным поражением респираторного тракта и сопровождается гибелью животных и снижением их продуктивности [6,9,12]. Значительное количество кроликов бракуют. 

Основным источником возбудителя инфекции в таких хозяйствах являются животные-бактерионосители, количество которых может достигать 35-75 % [6,8-12]. 

Причиной респираторного пастереллеза у кроликов являются различные серологические варианты P.multocida. Данные, полученные зарубежными исследователями [6, 10, 12], свидетельствуют о том, что главная роль в этиологии пастереллеза у кроликов принадлежит P.multocida серотипов 3?А, 12?А, 1?D, 3?D. Причем, пастереллы серотипа А выделяются гораздо чаще, чем серотипа D. Напротив, Агаева Э.М. [1] в своих исследованиях все культуры P.multocida, выделенные от кроликов, отнесла к серотипу В. В Чешской Республике в 2001-2004 гг, было выделено 24 культуры P.multocida от больных пастереллезом кроликов, которые были типированы в ПЦР [8]. К серотипу А были отнесены 58,4 % выделенных культур пастерелл, к серотипу D - 8,3 %, а остальные 33,3 % были отнесены к серологической группе F.  

В последнее время на Украине изучению пастереллезной инфекции кроликов, особенно в условиях мелких частных хозяйств, уделяют недостаточное внимание. 

Цель работы: изучить биологические свойства и серовариантную принадлежность культур P.multocida выделенных от больных хроническими пневмониями кроликов в условиях фермерского кролиководческого хозяйства с сравнительно небольшим поголовьем животных. 

Материалы и методы. 

Работа выполнялась на аматорской кролиководческой ферме поголовье кроликов в которой составляло 342 головы. При проведении общеклинического осмотра животных было выделено 28 кроликов с хроническим поражением респираторного тракта. Для постановки диагноза животных подвергли диагностическому забою. 

Для выделения культур P.multocida пользовались биологическим способом [3]. Для чего из кусочков легких готовили суспензию на физиологическом растворе в соотношении 1?5. Суспензией в объеме 0,3 см3 внутрибрюшинно заражали по 3 белые мыши. За зараженными животными вели наблюдение в течение 5 суток. Для выделения чистой культуры пастерелл кровь из сердца агонирующих мышей высевали в МПБ и инкубировали 24 часа. 

 

Для изучения тинкториальных свойств выделенных культур, проводили окраску мазков из крови павших мышей по Романовскому-Гимзе. 

Суточные культуры окрашивали по Граму и Бурри-Гинсу. 

Определение биохимических свойств выделенных культур проводили согласно общепринятых методик. При определении способности микроорганизма расщеплять сахара в качестве тест-объектов использовали следующие углеводы? глюкозу, сахарозу, лактозу, мальтозу, галактозу, арабинозу, трегалозу, ксилозу, инозит, салицин, рамнозу, маннитол, сорбитол, дульцитол. 

Углеводы добавляли в среду следующего состава: пептон – 10г, NaCl – 5г, вода дистиллированная – 1000 см3, 10 см3 индикатора Андреде. Среду стерилизовали автоклавированием 15 мин при 121?С, затем асептично добавляли необходимое количество углеводов (1 % в конечной концентрации). Углеводы предварительно стерилизовали в виде 10 % водных растворов текучим паром дробно, два дня по 30 мин.  

Для изучения протеолитических свойств пастерелл провели определение сероводорода, индола, ферментов желатиназы, каталазы и уреазы, тесты на декарбоксилазы, оксидазную активность, восстановление нитрата, реакцию Фогеса-Проскауэра и пробу с метиловым красным.  

Идентификацию выделенных культур проводили несерологическим методом типирования с использованием гиалуронидазы стафилококка и акрифлавина. 

При идентификации P.multocida серовара А на поверхность кровянного агара в чашки Петри штрихом высевали суточную культуру пастерелл. После этого перпендикулярно линиям посева по всему диаметру чашек высевали суточную бульонную культуру Staphilococcus aureus. Чашки с посевами инкубировали в термостате при 37 С? в течение 24 часов и проводили учет роста культур. 

Для обнаружения P.multocida серовара D испытуемую культуру высевали на кровяной агар и инкубировали при 37 С? в течение 24 часов, затем проводили пересев в пробирки содержащие 3 см3 больона Хоттингера. Инкубировали при 37 С? в течение 18 часов. Затем бульонные культуры переносили в центрифужные пробирки и центрифугировали при 3000 мин-1 на протяжении 20 минут. После центрифугирования 2,5 см3 надосадочной жидкости сливали, а в оставшейся ресуспендировали осевшие клетки добавили 0,5 см3 свежеприготовленного водного раствора нейтрального акрифлавина 1:500. Перемешивали и оставляли при комнатной температуре; через 20 минут проводили учет реакции. 

Патогенность эпизоотических культур пастерелл определяли путем постановки биологической пробы на белых мышах. Для этого использовали 18-24-часовую цельную бульонную культуру пастерелл и культуру разведенную физиологическим раствором 10-6 и 10-8. Цельную культуру и ее разведения вводили подкожно в объеме 0,2-0,3 см3 трем белым мышам. За зараженными животными наблюдали 14 суток. Меру выраженности патогенности – ее количественный эквивалент, вирулентность, находили по формуле Кербера-Спирмена-Ашмарина и описывали доверительным интервалом ЖМК, с уровнем значимости не менее P<0,95 (первый порог достоверности). 

Результаты исследования.  

При проведении общеклинического обследования животных данного хозяйства было выделено 28 кроликов (8,2 %) с хроническим поражением респираторного тракта. У данных животных констатировали угнетение, снижение аппетита, отставание в росте, субфебрильное повышение температуры (39,5-40,0 С?), двусторонний гнойный ринит и серозно-катаральный конъюнктивит. Аускультативная картина характеризовалась наличием жесткого везикулярного дыхания и рассеянными мелкопузырчатыми хрипами.  

На вскрытии установили увеличение селезенки, заглоточных и медиастинальных лимфоузлов. В плевральной полости отмечали скопление серозно-фибринозного экссудата; в легких – очаги гнойно-фибринозного воспаления. 

От кроликов было выделено 16 культур микроорганизмов. Изучаемые культуры были представлены мелкими коккобактерирями, расположенными одиночно, попарно или короткими цепочками. В мазках крови из сердца мышей, окрашенных по Романовскому-Гимза, была замечена выраженная биполярность. В мазках, приготовленных из суточных бульонных культур констатировали мелкие грамотрицательные овоидные палочки и выраженную капсулу, при окраске по Бурри-Гинсу. 

В МПБ через 9-11 часов появлялась легкая опалесценция, при встряхивании отмечали «муаровые волны», S-форма роста. На вторые сутки интенсивность помутнения бульона нарастала, и появлялся незначительный осадок, который на третьи-четвертые сутки превращался в слизистый осадок, поднимающийся при встряхивании в виде неразбивающейся косички, отрывающейся при интенсивном встряхивании, бульон становился прозрачным; т. е. наблюдался переход культуры в М-форму.  

На МПА в течение суток формировались мелкие прозрачные «росинчатые» колонии, S-форма колоний; которые постепенно увеличивались в размерах и мутнели через 4-5 дней; культура трансформировалась в М-форму. При добавлении к МПА 5% дефибринированной крови резко повышалась интенсивность колониального роста. Колонии формировались сразу в М-форме, были массивными, слизистыми, непрозрачными, красно-коричневого цвета с зеленоватым оттенком, зоны гемолиза не было.  

Биохимические свойства у изучаемых культур были различными. При этом установили, что все культуры разлагали глюкозу, сахарозу, декстрозу, фруктозу, маннозу, галактозу до образования кислоты без газа. Не сбраживали лактозу, мальтозу, рамнозу, арабинозу, рафинозу, не расщепляли салицин, дульцит, глицерин, инулин, не разжижали желатин, не свертывали молоко. Четыре культуры (25 %) не сбраживали ксилозу, трегалозу, дульцит, слабо ферментировали сорбит. Остальные одиннадцать культур (75 %) не сбраживали ксилозу, трегалозу и ферментировали дульцит и сорбит. Все культуры были каталазоположительны, восстанавливали нитраты до нитритов, реакции с метиловым красным и Фогеса-Проскауэра были отрицательные. На агаре Макконки не росли, на кровяном агаре гемолиз не вызывали.  

На основании изучения тинкториальных, культуральных и биохимических свойств изолированные культуры были идентифицированы как P.multocida.  

В результате проведения типизации с использованием гиалуронидазы стафилококка у 11 культур наблюдали уменьшение размера и отсутствие флуоресценции колоний пастерелл, примыкающих к линии роста стафилококков, что является характерным для P.multocida серовара А. У остальных культур угнетения роста не выявили. При проведении теста с использованием водного раствора акрифлавина 4 испытуемые культуры образовывали крупнохлопчатый флокулят, что является типичным для P.multocida серовара D. 

Культуры пастерелл были патогенны для лабораторных животных. Одиннадцать культур убивали в разведении 10-6 часть белых мышей за 4-5 суток, количественное значение LD50 было представлено доверительным интервалом 31,3<41,8<208,0 ЖМК при уровне значимости не менее P<0,95. Данное свойство характерно для пастерелл, относящихся к серологическому варианту А. Остальные культуры были наименее патогенными, белых мышей убивали только нулевое десятикратное разведение бульонной культуры в течение 5-7 суток, LD50 составляла 14,13х107 ЖМК с доверительным интервалом 0,94 lg при уровне значимости не менее P<0,95, что является специфичным для P.multocida серовара D. Разведение 10-8 всех исследуемых культур не вызывало гибели мышей. 

В заключении необходимо отметить, что от 28 кроликов с хроническим респираторным синдромом было выделено 16 культур P.multocida, которые являлись представителями двух серологических вариантов. Одиннадцать культур (75 %) были отнесены к серовару А; остальные четыре культуры были типированы как P.multocida серовара D. Полученные экспериментальные данные по изучению биохимических свойств полевых культур P.multocida совпадают с видовыми и подвидовыми признаками P.multocida, приведенными в кратком определителе бактерий Берджи [4] и определителе нетривиальных патогенных грамотрицательных бактерий [5], P. multocida серовар А соответствует подвиду P. multocida subsp. gallicida (сорбитол-положительные, дульцитол-положительные), P. multocida серовар (сорбитол-положительные, дульцитол-отрицательные) Д соответствует подвиду P. multocida subsp. multocida.  

Выводы: 

  1. Выделено 16 культур P.multocida при хроническом респираторном синдроме у кроликов, при чем 75 % (11 ) выделенных культур были отнесены к серологическому варианту А. Остальные 4 культуры (25 %) являлись представителями серовара D.
  2. Отличия биохимических свойств и вирулентности выделенных культур совпадают с их серовариантной принадлежностью.

Список использованной литературы 

1. Агаева Э.М. Иммунохимические свойства капсульного антигена и серологические типы Pasteurella multocida: Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук: 16.00.03. – М. – 1981. – 18 с.

2. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. – Л.: Медгиз, 1962. – 178с.

3. Геведзе В.И. Пастереллез крупного рогатого скота. - Минск? Ураджай, 1989. – 135 с.

4. Определитель бактерий Берджи. В 2-х т. Т. 1: Пер. с англ. / Под ред. Дж. Хоула, Н. Крига, П. Снита, Дж. Стейли, С. Уилльямса. –М.: Мир, 1997. –С.200-203, 281-289.

5. Определитель нетривиальных патогенных грамотрицательных бактерий / Вейант Р., Мосс У., Уивер. и др. Пер. с англ. Под ред. Дж. Хоулта. – М.: Мир, 1999. – 700с.

6. Al-Haddiwi M.F. Pathogenicity of Pasteurella multocida serotypes A:3, D:1 and D:3 in rabbits//Dissertation, Thesis. – 1999. – 333 p.

7. Haemorrhagic septicaemia/OIE Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestial Animals Fifth Edition, 2004. – Vol.1. – P. 537-548

8. Jaglic Z., Kucerova Z., Nedbalcova K., Hlozek P. аnd Bartos M. Identification of Pasteurella multocida serogroup F isolates in rabbits//Journal of Veterinary Medicine Series B. – 2004. – Vol.51. - №10.- P.467-471

9. Lu Y.S., Pakes S.P, Rehg J.E., Ringler D.H. Pathogenicity of serotype 12?A Pasteurella multocida in hydrocortisone treated and notreated rabbits//Lab.Anim.Sci. – 1982. – Vol.32. – P. 258-262

10. Lu Y.S., Pakes S.P. and Stefanu C. Capsular and somatic serotypes of Pasteurella multocida isolates recovered from healthy and diseased rabbis in Texas// J. of Clinical Microbiology. – 1983. – Vol.18. - №2. – P.292-295

11. Patton N.M. Pasteurellosis in rabbits: a review and update// J. appl. Rabbit. Res. – 1998. – Vol. 11. - №3. – P.111-112

12. Rimler R.B., Brogden K.A. Pasteurella multocida isolated from rabbits and swine: serologic types and toxin production// Am. J. Vet. Res. – 1986. – Vol. 47. - №4. – P.730-737  

 

БІОЛОГІЧНІ ВЛАСТИВОСТІ КУЛЬТУР PASTEURELLA MULTOCIDA ВИДІЛЕНИХ ПРИ РЕСПІРАТОРНОМУ ПАСТЕРЕЛЬОЗІ КРОЛІВ 

Руденко А.А., аспірант, Сосницький О.І., канд. вет. наук, доцент Луганський національний аграрний університет, м. Луганськ  

Проведено дослідження з вивчення біологічних властивостей P.multocida ізольованих від хворих хронічними пневмоніями кролів в умовах аматорської кролеферми. У кролів виділено 16 культур P.multocida при хронічному респіраторному синдромі, при чому 75 % (11) виділених культур були представниками серовара А. Інші 4 культури (25 %) були віднесені до серологическому варіанта D.

BIOLOGICAL PROPERTIES OF CULTURES PASTEURELLA MULTOCIDA DISCHARGED AT RESPIRATORY PASTEURELLOSIS IN RABBITS. 

Rudenko А.А., graduate student, Sosnitskiy A.I., Cand. Sc. (Vet.) Lugansk national agrarian university, Lugansk  

Researches on studying biological properties P.multocida isolated from patients with chronic pneumonias in rabbits in private to a rabbit breeding farm are lead. 16 cultures of P.multocida are discharged at a chronic respiratory set of symptoms in rabbits and 75 % (11) discharged cultures were representatives of a serovar of A. Others of 4 cultures (25 %) have been referred to serologic variant D 

перейти к списку>>

Другие статьи:

Вопросы и ответы о собаках и кошках:


 

 


 

Вся информация на сайте предоставлена в ознакомительных целях. По вопросам диагностики, лечения и профилактики болезней животных необходимо обращаться к ветеринарным специалистам. Любое использование материалов без активной ссылки на сайт doktorvet.com запрещено!

©"DoktorVet.com", 2013-2015