Окраска по Цилю-Нильсену
Краситель Циля-Нильсена (ЦН) используется для определения кислотоустойчивых бактерий.
Способ основан на способности клеточных стенок некоторых видов бактерий, окрашенных анилиновыми красителями (например, фуксином), сохранять окраску после обработки концентрированными кислотами. Такие клеточные стенки трудно поддаются окрашиванию; для того, чтобы краситель мог проникнуть внутрь, препарат обрабатывают фенолом в комбинации с нагреванием. Затем его докрашивают метиленовым синим для контрастирования с красной окраской кислотоустойчивых бактерий.
Метод окраски по Цилю-Нильсену имеет большое значение для определения микобактерий и некоторых штаммов Nocardia, которые трудно культивировать и которые потенциально зоонозны. Определение кислотоустойчивых микроорганизмов в цитологических мазках всегда важно.
При подозрении на микобактериальную инфекцию на основании окраски по Цилю-Нильсену образец с хорошо заметной предупредительной надписью необходимо отослать в соответствующую лабораторию. Целесообразно перед этим позвонить в лабораторию.
Слабо-кислотоустойчивые микроорганизмы не обесцвечиваются 5% серной кислотой (модифицированный метод ЦН), но обесцвечиваются 20%. К таким микроорганизмам относятся бруцеллы и нокардии.
Методика.
1. Залейте мазок 1% карболовым фуксином
2. Подогрейте стекло над пламенем, пока не пойдет пар
3. Периодически нагревайте стекло в течение 5 минут, чтобы оно оставалось горячим
4. Не позволяйте красителю высохнуть. При необходимости добавьте еще карболового фуксина
5. Смойте остатки красителя водой
6. Залейте стекло 20% серной кислотой и оставьте на 5 минут
7. Смойте водой
8. Повторяйте обработку кислотой до тех пор, пока краситель не перестанет стекать со стекла (на это потребуется не менее 10 минут)
9. Залейте стекло 95% спиртом и оставьте на 2 минуты
10. Смойте водой
11. Покрасьте метиленовым синим Леффлера или 0,1% малахитовым зеленым в течение 20 секунд.
Примечания
- Некоторые растворы, использующиеся в данном методе, обладают сильным коррозирующим действием. При работе используйте защитные очки. Соблюдайте правила техники безопасности при работе в лаборатории.
- При модифицированном способе окраски по Цилю-Нильсену на 6 ступени используется 5% серная кислота.
перейти к списку>>
Статьи по теме: