ветеринарная медецина - консультация
крестик
телефон
восклицание
карандаш
форум
Реклама:

 


Окраска по Граму 

Это основной способ, использующийся в бактериологии.

Основан на реакции основного парарозанилинового красителя (например, кристаллического фиолетового, метилового фиолетового или их смеси, так называемого генцианвиолета) с йодом.

Продуктом этой реакции является нерастворимое соединение темно-красного цвета в клеточной стенке бактерий. Это вещество удаляется обесцвечивающими растворителями (такими, как ацетон или спирт). Степень обесцвечивания зависит от структуры и толщины клеточной стенки.

Для демонстрации обесцвеченных микроорганизмов используют более светлый докрашивающий краситель.

Грамположительные микроорганизмы устойчивы к обесцвечиванию и остаются темно-пурпурными. Эта устойчивость не постоянна, и при продолжительном обесцвечивании краситель все же смывается.

Грамотрицательные микроорганизмы, как и весь цитологический препарат, окрашиваются в розовый цвет.

В культурах и образцах, содержащих грамположительные микроорганизмы, может содержаться какое-то количество грамотрицательных клеток, особенно если образцы старые.

В литературе описано 4 различных схемы окраски по Граму. Ключевыми моментами являются только порядок добавления реагентов, время обесцвечивания и тщательное удаление всех реагентов.

Существуют готовые наборы для окраски по Граму, к которым должна прилагаться инструкция от производителя.  

 

Методика

1. Зафиксируйте мазок, проведя его несколько раз над пламенем

2. Залейте мазок 0,5% метиловым фиолетовым или 1% кристаллическим фиолетовым и оставьте на 1 минуту

3. Смойте водой

4. Залейте мазок 1% йодным раствором люголя и оставьте на 1 минуту

5. Смойте водой

6. Залейте 95% спиртом и осторожно покачайте, пока краска не перестанет смываться с мазка. Это займет не менее 30 секунд. Если мазок очень толстый, можно добавить свежий спирт для ускорения обесцвечивания.

7. Промойте стекло однократно водой

8. Покрасьте мазок 0,5% основным фуксином в течение 30 секунд, 0,1% нейтральным красным в течение 2 минут, или 0,5% сафранином в течение 10 секунд.

Примечания

  • Для обесцвечивания можно использовать ацетон. Он действует быстрее, чем спирт (2 секунд бывает достаточно), но есть опасность слишком сильного обесцвечивания.
  • Ацетон более опасен при попадании на кожу или на одежду.  

Видео

перейти к списку>>

Статьи по теме:

Другие статьи:


 

 


 

Вся информация на сайте предоставлена в ознакомительных целях. По вопросам диагностики, лечения и профилактики болезней животных необходимо обращаться к ветеринарным специалистам. Любое использование материалов без активной ссылки на сайт doktorvet.com запрещено!

©"DoktorVet.com", 2013-2015