ветеринарная медецина - консультация
крестик
телефон
восклицание
карандаш
форум
Реклама:

 


Методы оценки подвижности спермиев быков  

Для оценки подвижности спермиев быков, сперму наносят на предметное стекло и смешивают с каплей подогретого до 35 0С 2,9-ного раствора цитрата натрия, после чего определяют активность под микроскопом. О характере движения спермиев можно судить при просмотре препарата на предметном стекле при увеличении под микроскопом в 120-280 раз. Нормальные спермии обычно движутся против тока жидкости (реотаксис).

Ток жидкости легко создать на предметном стекле, слегка приподняв один из его углов. После этого можно наблюдать, как все активно перемещающиеся спермии устремляются против этого тока в одном направлении.

Спермии, обладающие до этого плохой подвижностью, продолжают передвигаться беспорядочно. Кроме того, поле зрения микроскопа лучше разделить на четыре равные части путем помещения в окуляр двух образцов конского волоса в виде перекрещивающихся под прямым углом диаметров. При этом легче выбрать более однородные места препарата, в которых ведется счет отдельно в каждой ? части.

Считаются все видимые спермии до 10, отдельно фиксируются спермии, имеющие прямолинейное поступательное движение. Для удобства учета спермиев в густой сперме к нанесенной на предметное стекло капле спермы добавляют каплю 1%-ного раствора поваренной соли или 2,8% раствора цитрата натрия. Капли необходимо тщательно смешать, если капли накрыть покровным стеклом, не перемешав, то в зону раствора перейдут подвижные спермии, что приведет к ошибке в оценке. 

Одним из обязательных контролей поступающей в продажу замороженной спермы является определение количество активных спермиев в дозе.

Для этого применяется разработанный фотограмметрический метод.

Сущность метода оценки подвижности спермиев быков заключается в микрофотосъемке и подсчете движущихся спермиев после оттаивания.

Для этого необходимо иметь реактивы и аппаратуру для черно-белой обработки фотоматериалов, фотопленку чувствительностью 130 ГОСТ (160 ASA) 24 ?36 мм, трехзамещенный лимоннокислый натрий 2,8% раствор, баню водяную с постоянной температурой 37 ?0,5 0С, микроскоп с оптической системой, обеспечивающей увеличение в 60…140 раз (объектив 5 и окуляр 12…28?) для наблюдения и в 25 раз (объектив и окуляр фотонасадки 5?) для фотографирования с темнопольным конденсором и фотонасадкой, счетную камеру для подсчета клеток крови глубиной 100 микрометров, набор меланжеров и микропипеток.

  • Дозу глубокозамороженной спермы в виде облицованных гранул, соломинок или пробирок помещают в водяную баню (t = 37 ±0,5 °С) до полного оттаивания. Концентрацию спермиев путем разбавления 2,8% раствором трехзамещенного лимоннокислого натрия при температуре 37±0,5 °С доводят до 1,5…2 млн в мл. Тщательно перемешивают пробу, микропипеткой заправляют подогретую (t =37±0,5 °С) счетную камеру и помещают ее на термостатирующий столик микроскопа. 
  • Устанавливают в микроскопе увеличение в 60…140 раз и добиваются резкого изображения объекта. Регулировкой системы освещения (применяется осветитель - 20 вт, 12 В с реостатом) добиваются эффекта темного поля, экспонируют 2 секунды три участка камеры на стандартную пленку (окуляр фотонасадки 5?, объектив 5?). При этом в каждом кадре размещают по 15 больших квадратов счетной камеры. Проявляют негативную пленку и готовят три фотографии. Живые спермии оставляют на фотографии трассы своего движения, а мертвые обычную форму. Это дает возможность различать на фотографии живые и мертвые спермии. После этого подсчитывают количество оставленных трасс на 3 фотографиях. Для подсчета отбирают 45 больших квадратов камеры общей площадью 1,8 мм2, ограничивающей объем 18?10 в минус 5 степени см3. 
  • Количество активных спермиев определяют по формуле: 

где V1 – объем дозы спермы; n – количество подсчитанных спермиев в 45 квадратах; D – степень разбавления пробы спермы; V=18?10 в минус 5 степени см3 – объем, ограниченный 45 большими квадратами счетной камеры. 

перейти к списку>>

Статьи по теме:

Другие статьи:


 

 


 

Вся информация на сайте предоставлена в ознакомительных целях. По вопросам диагностики, лечения и профилактики болезней животных необходимо обращаться к ветеринарным специалистам. Любое использование материалов без активной ссылки на сайт doktorvet.com запрещено!

©"DoktorVet.com", 2013-2015